精液检查及精子制备技术方法

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1、精液检查及精子制备技术方法—、精液常规检查操作方法实验者收到取精杯后应首先核对取精杯上姓名、编号是否与精液送检单符合，同时核对精液送检报告上是否漏填重要信息，确认无误后方可接受，同时记录精液采集时间，按《WHO人类精液及精子一宫颈粘液相互作用实验室检验手册(第四版)，以下简称WHO实验手册》所规定的方法作精液常规检查，并以其规定格式出检验报告。同—份精液标本若有多个检查项目，按各项目要求分别作标本处理和检验。（—)初步检验：l液化后精液检查前应认真记录：精液分析处理通知单所提供的详细资料2记录：精液量、颜色、粘度、PH值及液化时间3取液化精液10~20微升

2、，滴于洁净载玻片上加盖玻片静置片刻4置生物显微镜下，观察精液大致状况并记镜下所见：圆细胞数(生殖道上皮细胞、生精细胞和白细胞)、红细胞数和凝集团块等，并以个／HP表示。(二)操作方法：l取液化后精液3—5微升，滴于MACRO计数板中央计数池内，加盖；2置生物显微镜下观察精子浓度及活力。具体方法为：计数10个小格内a、b、c、d各级精子数量，a+b+c+d之和即为精子浓度(X106／mL)，精子活力分别以a级精子、a+b级精子和c级精子占总精子的百分比表示，计算方法分别如下：a／(a+b+c+d)X100％、(a+b)／(a+b+c+d)X100％、c／(a

3、+b+c+d)X100％。附精子分级标准a级：表示精子为快速前向运动b级：慢速或呆滞的前向运动c级：非前向运动d级：不运动（三)检验后处理1以清水冲洗MACRO计数板；2以酒精擦拭显微镜台面及实验台面3一次性实验物品丢弃于指定地点；4剩余标本按规定进行污物处理。二、精子形态分析操作方法l取液化后精液20uL，滴于载玻片一端（上约1/3处）2用另一张载玻片，置于滴有精液处与其形成30度角，均匀拉开液滴（详见WHO实验手册)．置室温干燥；3将干燥后的载玻片置于90％酒精液中固定15分钟，取出室温干燥后行巴氏染色；4l00X油镜下行精子形态学分析，结果描述：(参

4、阅WHO实验于册)正常形态率——％异常形态率——％（分别记录：头、体、尾及混合畸形率）；三、精子低渗膨胀实验(HOS)(—)配制低渗膨胀液溶0．735g枸橼酸钠和1.351g果糖于100ml蒸馏水中,将该溶液分装冰冻，于一20℃存放。用前解冻并充分混匀。(二)实验方法l取1mL膨胀液于一只加盖的Eppendorf试管中，37℃温热约5min。加入约0.1mL液化的精液，并用吸管轻轻搅匀。2在37℃下至少保持30没min(注意：不要超过120min)，并用相差显微镜观察精子细胞。3将所计数的200个精子中膨胀精子数重复计数两遍，并计算平均百分比。精子尾部形状

5、发生变化的定为精子膨胀。(三)结果描述如果精液标本中有60％以上的精子出现尾部肿胀，则描述为“HOS试验正常”。如果尾部肿胀的精子数低于50％，则描述为“HOS试验异常”(四)注意事项l某些精液标本在置于HOS溶液前会出观尾部卷曲的精子，因此要在放置于HOS溶液前观察射精液。处理后所获得的尾部卷曲的精子的百分比减去未处理标本中尾部卷曲的精子的百分比，即可以得到HOS试验中出现反应的精子的实际百分比2在临床使用之前，应当用老批号的HOS溶液对新批号的HOS溶液进行校验，评分不应有显著性差异（配对t检验p>0.05)。如果差异显著，应废弃该批试剂，重新配制。四

6、、全自动精子分析系统使用说明(MIAS2．0医学图像分析系统)全自动精子分析系统可自动探测精子运动轨迹，按WHO中CASA各项参数指标，计数精子活率、活力分级、密度、直线运动速率等。由电脑软件和显微镜两部分组成。其操作方法如下：(一)初步检验：参见粘液常规检查操作方法相关部分(二)自动分析：l开启电脑→精子分析系统→建立新档案(键入患者相关内容)→保存2取液化后精液3～5微升，滴于精子计数板中央计数池内，加盖玻片→置显微镜下(20X)调节视野至图像清晰3点击轨迹分析→图像捕捉→选择去非精子细胞参数→键入细胞数→分析→保存结果→分析结束(总计分析3—5个视野

7、)→报告单（选择报告预览或报告打印)→退出分析系统4报告部分内容记录于门诊登记簿(三)分析后处理：参见精液常规检查操作方法相关部分：五、抗精子抗体(MAR)检测方法(一)原理；本实验以人IsG敏化绵羊红细胞，用人北G制备羊抗人北c血采用l仪R法检测标本中Ig6类抗精于抗体。试剂山八液、9液、C液组成。<二)步骤；1取液化精液20微升滴于载圾片上，加入A液20微升混匀，放置娟秒；2加入D液混匀，加盖玻片。分别在3分钟和10分钟后生物显微镜(40X：相差镜下镜检，观察运动精于表面是否黏附有敏化的红细胞(sRBC)。(--)结果判定：l精子表面无AsAb，可见精

8、子在粘附的sRBC间自由泳动，敏化sRBC间的凝集说明试剂可靠。2