琼脂糖凝胶电泳鉴定pcr产物课件

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1、琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物【目的】掌握DNA琼脂糖凝胶电泳检测的原理，熟悉其方法。12琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。D-半乳糖3,6-脱水-L-半乳糖【原理】34PCR产物混合荧光染料（SYBRGreenI)以及指示剂（溴酚蓝）后，以琼脂糖凝胶为支持介质，在电泳冲液中电泳，根据DNA片段的大小、构型分离成不同区带，在紫外光下观察。【原理】5SYBRGreen能结合到双链DNA的小沟部位SYBRGreen只有和双链DNA结合后才发荧光琼脂糖凝

2、胶不吸收紫外光紫外灯下，结合有SYBRGreen的PCR产生发出荧光SYBRGreen6SGSGSGSGSGSGSG5’3’5’3’EmissionExcitationSYBRGreen结合的数量与DNA含量成正比——定量7DNA的片段大小与相对迁移率相关——分子量8【试剂与器材】1.PCR产物、荧光染料（SYBRGreen)2.样品缓冲液（含溴酚蓝）2.微量加样器3.电泳仪、电泳槽4.琼脂糖5.TBE电泳缓冲液（pH8.0）9【操作】制胶适量琼脂糖适量电泳缓冲液琼脂糖胶溶液Δ10123440mL点样

3、孔朝负极–+去封口胶布11制样制胶点样3倒上电泳缓冲液，使其没过点样孔。12内容体积（μL）PCR产物8SYBRGreen染料1溴酚蓝样品缓冲液1取0.2mL离心管，按下表制备电泳样品轻轻混匀。13制样制胶点样样品（10μL）3倒上缓冲液，使其没过点样孔。小心！！！点样孔不要戳破14制样制胶点样电泳80－100V，40min,负极向正极。结束后，取出琼脂糖凝胶，置于紫外观察箱中观察。绘制电泳结果，进行分析和讨论。15制胶时，要注意梳子的低部要距制胶板1mm以上。(2)凝胶冷却时要水平放置，完全凝固后才

4、能使用。(3)点样时要小心，不要戳穿点样孔。(4)点加样品时，要缓缓加入，不能太快，否则样品容易外溢，产生交叉污染。(5)样品点于电泳槽负极。操作注意事项：