D二聚体及其测定方法探讨.doc

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1、D二聚体及其测定方法探讨【摘要】D二聚体(DDimer)是纤维蛋白特异性降解产物，可有效地标志稳定的纤维蛋白的出现，其检测对血栓性疾病的诊断及治疗观察具有重要应用价值［1，2］。本文综述了D二聚体的形成及其主要的检测方法：凝集法、ELISA法、及酶联荧光分析法、免疫金标法。随着方法学的发展及市场推广，早已由科研项目转变为常规项目。【关键词】D二聚体；检测方法；纤溶　　纤溶酶(PL)可降解纤维蛋白原、纤维蛋白单体、交联性纤维蛋白。纤维蛋白原在凝血活酶作用下形成纤维蛋白单体，纤维蛋白单体由XⅢa作用下通过r'r'键变成网状的多聚体，形成交联纤维蛋白。与此同时，在PL作用下产生各

2、种大小不同片段的纤维蛋白降解产物。D二聚体则是含r'r'键的片段，是交联纤维蛋白的特异性降解产物。所以血浆中检测D二聚体有助于血栓性疾病的早期诊断及对溶栓药物治疗的疗程监测和疗效考核［3］。本文就D二聚体的形成特性以及主要测定方法作一简单叙述。　　1D二聚体的生成及特性　　1.1D二聚体的形成纤维蛋白原在凝血酶作用下转变为纤维蛋白，并最终形成稳定的纤维蛋白凝块。凝血酶生成后即与纤维蛋白原的底物部位作用，首先裂解纤维蛋白原分子中的2条Aα链的氨基端精氨酸16甘氨酸17键，释放出一对纤维蛋白肽A(FPA)，由此产生α链新的氨基末端(甘氨酸—脯氨酸—精氨酸)，生成纤维蛋白单体Ⅰ

3、；然后凝血酶再裂解纤维蛋白单体Ⅰ分子中2条Bβ链的氨基端精氨酸14甘氨酸15键，释放出一对纤维蛋白肽B(FPB)，由此产生β链新的氨基末端(甘氨酸—组氨酸—精氨酸)，生成纤维蛋白单体Ⅱ；纤维蛋白单体Ⅰ与Ⅱ生成后即开始自发性聚合。FPA和FPB的释放分别出纤维蛋白单体中央E区的两种“聚合部位”。一个纤维蛋白单体中央E区的“聚合部位”可与另一个纤维蛋白单体外周D区的“互补部位”以非共价结合，这样两个纤维蛋白单体即会形成一部分重叠而又不稳定的非共价复合物，第三个纤维蛋白单体加入后能以同样方式与其中之一纤维蛋白单体相连，而由此形成的聚合体中，两个相邻单体的D区将发生端端聚合作用。如此纤维蛋

4、白单体通过分子间ED区和DD区的相互作用形成可溶性纤维蛋白单体复合物。在因子XⅢa作用下(需Ca2+参与)，相邻纤维蛋白单体的γ链可通过一条γ链的398或399位上的谷胺酰胺与另一纤维蛋白单体上γ链的406位赖氨酸之间形成ε(谷氨酰)赖氨酸键而快速共价交联，形成［ε(γglu)lys］n。纤维蛋白交联后将形成稳定的纤维蛋白凝块。形成的r'r'连结键是原来纤维蛋白单体所不具备的［4～6］。PL对纤维蛋白(原)形成过程中的各个阶段均有降解作用，对纤维蛋白原，PL通过对精氨酸—赖氨酸的降解作用，先从纤维蛋白原Bβ链上裂解下来一个小肽段Bβ142，在Aα4上裂解下来一种极附属物。极

5、附属物由碎片A、B、C和H组成，留下的片段称为X片段。后者在纤溶酶作用下，裂解为D片段和Y片段，Y片段再进一步裂解为终产物D片段和E片段。纤溶酶对可溶性纤维蛋白单体复合物的降解作用，除形成X’、Y’、D、E’、片段和Aα极附属物外，还从Bβ链上裂解下Bβ1542小肽，统称为纤维蛋白降解产物(FgDPs)。而交联纤维蛋白在纤溶酶作用下，除形成X’、Y’、D、E’片段外，还形成DD、γγ二聚体、Aα极附属物及复合物1(DD/E)、复合物2(DY/DY)、复合物3(YY/DXD)和YXD/DXY等，统称为纤维蛋白降解产物(FbDPs)。D二聚体则是含r'r'键的片段，是交联纤维蛋白

6、的特异性降解产物［4～6］。　　1.2D二聚体的特性D二聚体的分子量为190000，等电点(PI)为4.9~5.3，经β巯基乙醇还原后出现相当于81000个r'r'交联键。D二聚体在280nm下克分子消光系数为17.8。D二聚体在体内的半衰期>3h，主要通过肾脏排泄。正常人血浆中的D二聚体<400μg/L，随检测方法不同略有差异。将一定浓度的D二聚体与人幼稚单核细胞白血病细胞系(NOMO1)，发现D三聚体可刺激NOMO1分泌尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)和纤溶酶原激活剂抑制物2(PAI2)，引起NOMO1表面组织因子(TF)表达活性增强。此外D

7、二聚体还可促使NOMO1生成超氧阴离子，促进白细胞介素1α(IL1α)和白细胞介素1β(IL1β)的释放。DD的生成反映机体凝血和纤溶系统的激活，在各种血栓形成性疾病以及生理性高凝状态时均有升高。特别是对静脉血栓形成(venousthromboembolism,VTE)高度敏感，在VTE的排除诊断中具有重要价值。另外，DD在心血管疾病、DIC、恶性肿瘤等疾病时，也有明显变化，可反映疾病的严重程度、发展变化、以及疗效和顶后的有用指标［