酵母表达培养基介绍

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1、毕赤酵母表达的培养基配制［5］2.1LB（Luria－Bertani）培养基：Tryptonl％YeastExtract0.5％NaCll％PH7.0制作平板时加入2％琼脂粉。121℃高压灭菌20min。可于室温保存。用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin25ug/ml。2.2LLB（LowSaltLB）培养基：Tryptonl％YeastExtract0.5％NaCl0.5％PH7.0制作平板时加入2％琼脂粉。121℃高压灭菌20min。可于室温保存数月。用于培养pPICZαA原核宿主菌

2、TOP10F’时，加入Zeocin25ug/ml，可以4℃条件下保存1～2周。2.3YPD（又称YEPD）YeastExtractPeptoneDextroseMedium，（YeastExtractPeptoneDextroseMedium，酵母浸出粉/胰蛋白胨/右旋葡萄糖培养基）Trypton2%dextrose(glucose)2%+agar2%+Zeocin100μg/ml液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。加入Zeocin100ug/ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～

3、2周。2.4YPDS+Zeocin培养基（YeastExtractPeptoneDextroseMedium）：yeastextract1%peptone2%dextrose(glucose)2%sorbitol（山梨醇）1M+agar2%+Zeocin100μg/ml不管是液体YPDS培养基，还是YPDS+Zeocin培养基，都必须存放4℃条件下，有效期1～2周。2.5MGYMinimalGlycerolMedium（最小甘油培养基）（34%YNB；1%甘油；4*10-5%生物素）。将800ml灭菌水、100ml的

4、10*YNB母液、2ml的500*B母液和100ml的10*GY母液混匀即可，4℃保存，保存期为2个月。2.6MGYHMinimalGlycerolMedium+Histidine（最小甘油培养基+0.004%组氨酸）在1000ml的MGY培养基中加入10ml的100*H母液混匀，4℃保存，保存期为2个月。2.7RDRegenerationDextroseMedium（葡萄糖再生培养基）（含有：1mol/L的山梨醇；2%葡萄糖；1.34%YNB；4*10-5%生物素；0.005%氨基酸）1.将186g的山梨醇定容至7

5、00ml，高压灭菌；2.冷却后于45℃水浴；3.将100ml的10*D、100ml的10*YNB；2ml的500*B；10ml的100*AA等母液和88ml无菌水混匀，预热至45℃后，与步骤2的山梨醇溶液混合。4℃保存。2.8RDHRegenerationDextroseMedium+Histidine（葡萄糖再生培养基+0.004%组氨酸）在RD培养基配制的第三步中，在加入10ml的100*H母液，同时无菌水的体积减少至78ml即可，其余配制方法与RD相同。4℃保存。2.9RD及RDH平板的制备1.将186g的山梨

6、醇和15-20g琼脂粉定容至700ml，高压灭菌；冷却后于60℃水浴；2.参照RD/RDH液体培养基配制的步骤4，将100ml的10*D、100ml的10*YNB；2ml的500*B；10ml的100*AA等母液、（10ml的100*H母液）和88（78）ml无菌水混匀，预热至45℃后，与步骤1的山梨醇/琼脂液混匀；3.迅速制备平板。4℃可保存数月。2.10RD及RDH的TOP琼脂的制备（常用于酵母菌的包被）1.将186g的山梨醇和7.5~10g琼脂粉定容至700ml，高压灭菌；冷却后于60℃水浴；2.参照RD/RD

7、H液体培养基配制的步骤4，将100ml的10*D、100ml的10*YNB；2ml的500*B；10ml的100*AA等母液、（10ml的100*H母液）和88（78）ml无菌水混匀，预热至45℃后，与步骤1的山梨醇/琼脂液混匀；3.将该TOP琼脂置于45℃水浴冷却、保温，备用。2.11MD与MDHMinimalDextroseMedium+（Histidine）最小葡萄糖培养基+（0.004%组氨酸）（含有：1.34%YNB；；4*10-5%生物素；2%葡萄糖）1.100ml的10*YNB；2ml的500*B和10

8、0ml10*D母液，用800ml的无菌水定容至1000ml即可；2.如配制MDH，可在上述的MD中加入10ml的100*H即可；3.如配制平板，可无菌水的灭菌前，加入15~20g的琼脂。4℃可保存数月。2.12SOC培养基：Tryptonl％YeastExtract0.5％NaCl0.05％Glucose(1mol/L)2%121℃高压灭菌20