磷酸盐缓冲液(pbs)配制方法

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1、实验方案镧铈对铜胁迫下豌豆种子萌发和生长的影响1.La(Ⅲ)、Ce(Ⅲ)对重金属胁迫下种子萌发影响的显效剂量筛选(1)浓度梯度设计：LaCl3/CeCl3溶液配置：先配置1g•L-1的LaCl3/CeCl3溶液母液，然后将母液分别稀释成浓度为5、10、20、40，60mg•L-1梯度浓度，调节PH（HCL/NAOH）至6.5，对照(CK)为PH调节至6.5的去离子水。重金属Cuso4浓度的设置：10、25、50、100、200、400mg•L-1，对照用蒸馏水。(2)试材培养种子预处理：选取均匀饱满的豌豆种子用0.1%HgCl2溶液消

2、毒15min，分别用自来水和去离子水洗净，常温下晾干备用。（3）实验设置：CK，La，Ce，Cu（共4组18个浓度57个样品）（4）试材处理：选取LaCl3、CeCl3和CuSO4各个梯度溶液溶液，豌豆种子经预处理后用各个梯度溶液浸没处理，对照用蒸馏水，置于25±1℃浸种24h后，将处理后种子均匀排列在直径9cm、垫有2层滤纸的培养皿中，每处理加入一定量水培养（以没过种子2/3为标准），每处理3皿重复，每皿20粒。指标测定方法：种子发芽第三天测α—淀粉酶，第四天测发芽势，前三天测发芽指数和发芽率，第五天测量根长、茎长，第六天测根系活力

3、、叶绿素含量、可溶性蛋白质、可溶性糖、SOD、POD、CAT、MDA.2．La(Ⅲ)和Ce(Ⅲ)对重金属胁迫下种子萌发及保护酶的影响(1)试材培养种子预处理：选取均匀饱满的豌豆种子用0.1%HgCl2溶液消毒15min，分别用自来水和去离子水洗净，常温下晾干备用。（2）实验设置：在上一步骤中分别筛选出LaCl3、CeCl3的低剂量、适宜剂量、高剂量三个有效浓度和CuSO4的一个有效浓度，分别记为A1，A2，A3；B1，B2，B3；C。（3）实验步骤：有以下几组：A+C:A1+C、A2+C、A3+CB+C:B1+C、B2+C、B3+CA

4、+B+C：A1+B1+C、A1+B2+C、A1+B3+C、A2+B1+C、A2+B2+C、A2+B3+C、A3+B1+C、A3+B2+C、A3+B3+C酸盐缓冲液（PBS）配制方法磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2M）pH0.2MNa2HPO4/ml0.2MNaH2PO4/ml7.061.039.07.789.510.57.891.58.5Na2HPO4·2H2O分子量＝178.050.2M溶液含35.61g/LNa2HPO4·12H2O分子量＝358.220.2M溶液含71.64g/LNaH2PO4·H2O分子量＝138.010.

5、2M溶液含27.6g/LNaH2PO4·2H2O分子量＝156.030.2M溶液含31.21g/L0.01MPBS PBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH7.2)PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L称7.9gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4(or1.44gNa2HPO4)和1.8gK2HPO4，溶于800ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH

6、值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L。保存于4℃冰箱中即可。母液的配制： 0.2MNa2HPO4：称取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水0.2MNaH2PO4：称取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2MPB(pH=7.4，100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4， 81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需将0.2MPB(pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：0.1MPB（PH=7.4）：取500ml0.2MPB，加水

7、稀释至1000ml即可。0.01MPB（PH=7.4）：取50ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。0.02MPB（PH=7.4）：取100ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。 若需要NaCl的话，加入NaCl至0.9%（g/100ml）即可。另：其它各种另PH值的0.2MPB（100ml)配方：pH      0.2MNaH2PO4（ml）        0.2MNa2HPO4（ml）7.0             38                           627.8             8.5

8、                         91.5 0.01M磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节